Antiviral and virucidal potential of melittin and apamin against bovine herpesvirus type 1 and bovine viral diarrhea virus

RESUMO: A busca por alternativa aos farmacos sinteticos tem revelado descobertas no campo da farmacologia e, nesse sentido, melitina e apamina, dois constituintes do veneno de abelhas, foram descritas com varias acoes farmacologicas. Este estudo objetivou avaliar in vitro as capacidades antiviral e virucida destes componentes. Para tanto, celulas MDBK (Madin Darby Bovine Kidney), apos verificacao das respectivas doses toxicas por ensaio MTT ((3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), foram cultivadas em microplacas e tratadas com diferentes concentracoes de apamina, melitina e sua associacao. Esse tratamento ocorreu antes e apos a infeccao com 0,1 MOI (multiplicidade de infeccao) de cepas citopatogenicas de herpesvirus bovino tipo 1 (BoHV-1) cepa Los Angeles e virus da diarreia viral bovina (BVDV) cepa NADL. Apos incubacao por 72 horas, 37oC, as celulas foram submetidas ao ensaio MTT para estimativa da viabilidade celular. Em experimento paralelo, placas que foram submetidas ao mesmo procedimento sofreram ciclo de congelamento e descongelamento das celulas, para rompimento das mesmas e mensuracao dos titulos virais. O ensaio virucida foi realizado incubando-se suspensoes de BoHV-1 e BVDV com as solucoes de apamina, melitina e associacao por 24 horas a 37oC e 22oC. O titulo viral foi avaliado as 0 horas, 1, 2, 4, 8 e 24 horas de incubacao. A concentracao citotoxica para 50% das celulas (CC50) de melitina foi 2,32 μg/ml e apamina nao demonstrou toxicidade a maior concentracao testada (100μg/ml). Houve efeito antiviral da melitina sobre BoHV-1, especialmente na concentracao de 2μg/ml, onde observou-se 85,96% de viabilidade celular quando o tratamento foi realizado antes da infeccao e 86,78% de viabilidade quando o tratamento foi realizado apos a infeccao. Houve ainda reducao de 90% das particulas virais de BoHV-1. Em menores concentracoes (1 e 1,5μg/ml) de melitina nao houve atividade antiviral, pois a viabilidade celular foi baixa, demonstrando efeito citopatico do virus. Na associacao das duas substâncias houve queda no titulo de BVDV e observou-se maior viabilidade celular quando comparados a acao isolada dos composto sobre este virus. Isso se confirma na atividade virucida, uma vez que houve decrescimo de 90% das particulas virais de BVDV com a associacao dos dois compostos do veneno de abelhas. Atuando individualmente, melitina apresentou efeito antiviral e virucida frente ao BoHV-1, zerando seu titulo em apenas 2 horas a 37oC. Conclui-se que melitina tem acao antiviral e virucida frente ao BoHV-1 e sua associacao com apamina potencializou seus efeitos frente ao BVDV.