DESENVOLVIMENTO DE MODELO DE CULTIVO DE CÉLULAS TRIDIMENSIONAL DA LINHAGEM CELULAR DE CARCINOMA DE PULMÃO DE NÃO-PEQUENAS CÉLULAS NCI-H460

A investigacao pre-clinica do fenotipo do câncer, agressividade e resistencia aos antineoplasicos e geralmente realizada em modelos in vitro de cultura de celulas tumorais em duas dimensoes (2D ou monocamada). Porem, esse modelo apresenta limitacoes, como baixa interacao celular com a matriz extracelular e entre celulas de diferentes linhagens. Tambem existem relatos que o efeito de algumas concentracoes dos antineoplasicos nao apresentam equivalencia in vivo dos valores encontrados na cultura 2D. Assim, os modelos de cultura 3D foram desenvolvidos para promover melhor simulacao das condicoes in vivo de interacoes celulares e expressoes fenotipicas, possibilitando que as celulas migrem para todas as direcoes, permitindo um aumento da superficie celular. Diante desses fatores o modelo de cultivo em 3D in vitro e o que mais se aproxima dos modelos in vivo . Os objetivos deste estudo foram desenvolver um modelo de cultura 3D (esferoides) para a linhagem celular de carcinoma de pulmao de nao-pequenas celulas (CPNPC) NCI-H460 e avaliar o efeito da cisplatina neste modelo. Primeiramente foram realizados testes para determinar a densidade inicial de celulas a serem utilizadas; apos foi monitorado o tempo de crescimento dos esferoides e padronizado o protocolo. As celulas foram plaqueadas em agar + meio de cultura completo e apos o crescimento, os esferoides foram coletados, tratados com concentracoes de 0-10 µg/mL de cisplatina. A analise foi realizada por mensuracao do diâmetro dos esferoides antes do tratamento, 48 h apos o tratamento e depois a cada 3 dias, ate os esferoides se desintegrarem. Observou-se que: 1) a densidade ideal a ser utilizada para este experimento nessa linhagem celular e 10x10 4 celulas, 2) o tempo para a formacao dos esferoides nessa linhagem e de 7 dias; 3) que as condicoes para o cultivo envolvem uma diluicao de 1:5 de agar em meio de cultura completo; 4) a durabilidade dos esferoides desta linhagem e cerca de 20 dias apos coletados; 5) os esferoides nao tratados apresentaram um aumento significativo de diâmetro em relacao aos tratados com cisplatina. Com isso, concluimos que o metodo de formacao de esferoides proposto por esse trabalho permite o uso de linhagens de CPNPC NCI-H460 como modelo de cultura 3D para estudos in vitro a fim de contribuir para conhecimentos mais profundos em relacao a pato-biologia do tumor e eficacia de farmacos antineoplasicos e que a cisplatina apresenta efeito inibitorio neste modelo 3D.