副溶血性弧菌CalR调控 vopB2 的分子机制

背景副溶血性弧菌是一种非常重要的食源性致病菌，CalR蛋白是一种全局转录调节因子。Ⅲ型分泌系统2 (Type 3 secretion systems 2 T3SS2)是副溶血性弧菌主要的毒力因子，vopB2是T3SS2中的一个关键效应蛋白。 目的研究副溶血弧菌CalR对vopB2的转录调控机制。 方法利用引物延伸实验鉴定vopB2及vtrA的转录起始位点，并根据产物的丰度判断CalR对靶基因的调控关系；采用实时定量RT-PCR研究靶基因mRNA在WT和ΔcalR中转录丰度，验证CalR对靶基因的转录调控关系，进一步利用LacZ实验通过比较β-半乳糖苷酶活性的差异来判定CalR对靶基因的调控关系；利用凝胶阻滞实验分析His-CalR对靶基因启动子区是否具有直接的结合作用。 结果vopB2有两个转录起始位点A (-130和-28)且其活性受CalR的直接抑制；引物延伸和LacZ结果表明CalR对vtrA的转录并无调控作用。 结论CalR直接抑制vopB2的转录，该抑制作用与vtrA无关联。