Procede d'amplification de terminaison repetee

L'invention concerne un procede d'amplification d'une sequence d'acide nucleique specifique ou du complement de celle-ci, a une temperature relativement constante et sans addition serielle de reactifs. Ce procede permet d'obtenir dans un seul milieu de reaction une ARN polymerase, une ADN polymerase, une ribonuclease qui hydrolyse l'ARN de l'hybride d'ARN-ADN sans hydrolyser l'ARN ou l'ADN mono ou bicatenaire, ainsi que des triphosphates de ribonucleoside et de desoxyribonucleoside. Ensuite, on obtient une premiere matrice d'ARN dans le milieu de reaction, laquelle comprend une sequence complementaire d'une sequence d'acide nucleique specifique, des sequences de sens moins destinees a un promoteur et a un site d'initiation qui sont reconnus par l'ARN polymerase, ainsi qu'une sequence terminale 5' complementaire d'au moins la sequence de sens moins du site d'initiation. Ainsi, la premiere matrice d'ARN possede une sequence repetee inversee pouvant se replier dans une structure terminale 5' tige-boucle. L'ADN polymerase utilise la premiere matrice d'ARN pour synthetiser une seconde matrice d'ADN, qui ensemble comprennent un hybride d'ARN-ADN. La seconde matrice d'ADN possede des sequences de sens plus du promoteur et du site d'initiation, ainsi qu'une sequence d'amorcage terminale 3' qui est complementaire de la sequence de sens plus du site d'initiation. La ribonuclease hydrolyse ensuite un ARN qui comprend l'hybride d'ARN-ADN, permettant ainsi a la sequence d'amorcage terminale 3' de s'hybrider a la sequence de sens plus du site d'initiation dans la seconde matrice d'ADN. L'ADN polymerase utilise ensuite la seconde matrice d'ADN pour synthetiser le promoteur en allongeant la sequence d'amorcage terminale 3' de la seconde matrice d'ADN. L'ADN resultant, partiellement bicatenaire, possede un promoteur oriente vers le sommet d'une structure tige-boucle. L'ARN polymerase reconnait ensuite le promoteur et transcrit la seconde matrice d'ADN, produisant ainsi des copies de la premiere matrice d'ARN. Ensuite, on conserve les conditions de reaction du procede pendant une periode suffisante pour mener a bien l'amplification souhaitee de la sequence d'acide nucleique specifique ou du complement de celle-ci. L'invention concerne egalement un necessaire contenant les reactifs de l'invention.