Analyse protéomique ciblée à haute résolution : un outil puissant pour le diagnostic clinique à partir de prélèvements de tissus amyloïdes bruts

L'amylose une maladie rare, caracterisee par des agregats insolubles de proteines extracellulaires. Trente types d'amyloses sont repertories et differencies par la proteine amyloidogene associee. Leur identification repose sur l'analyse immunohistochimique du tissu malade. Cependant, l'interpretation peut etre ambigue. La micro-dissection laser (LCM) et la spectrometrie de masse sont une alternative prometteuse. Nous avons developpe une approche proteomique ciblee a partir de tissus traites par ultrasons. Nous avons montre que les biopsies prelevees chez des patients atteints de differents types d'amyloses peuvent etre proteolysees sous ultrasons, ce qui augmente l'efficacite et reduit le temps de la digestion (90s au lieu de 15h), tout en minimisant la quantite de materiel necessaire. Apres une premiere etape de proteomique sans a priori pour le diagnostic clinique des patients presentant une amylose dans differents organes/tissus (reins, poumons, glandes salivaires, testicule, humeur vitree et rate), nous avons optimise une methode de criblage dediee a un transfert technologique vers les departements cliniques francais. Pour cela, deux methodes montrent des resultats tres encourageants : la SRM (selected reaction monitoring) sur un spectrometre de masse a basse resolution, disponible dans certains laboratoires cliniques et la PRM (parallel reaction monitoring) accessible sur les instruments de derniere generation a tres haute resolution, qui fournit rapidement des resultats. En conclusion, nous proposons ici un protocole specifique pour le diagnostic robuste et la classification rapide des amyloidoses.