通过小干扰RNA沉默mdr-1基因逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/TAXOL多药耐药的研究

目的 构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的多药耐药-1（mdr-1）基因的短发夹状RNA重组质粒,探讨RNAi沉默技术逆转卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞多药耐药的可行性.方法运用基因克隆技术构建靶向于mdr-1基因的重组质粒PGPU6/GFP/Neo-mdr-1并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3/TAXOL,反转录聚合酶链反应检测到mdr-1基因表达.CCK-8检测对SKOV3/TAXOL细胞增殖的抑制作用.结果构建的重组质粒PGPU6/GFP/Neo-mdr-1能明显抑制mdr-1基因的表达.蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒PGPU6/GFP/Neo-mdr-1的SKOV3/TAXOL靶细胞的抑制率显著提高.RT-PCR检测mdr-1基因mRNA转录水平下降;pPGPU6/GFP/Neo-mdr-1明显抑制SKOV3/TAXOL细胞的增殖.结论重组质粒PGPU6/GFP/Neo-mdr-1可有效地抑制SKOV3/TAXOL细胞内源mdr-1基因的表达和mRNA的转录,并抑制细胞的增殖和促进凋亡的发生,应用RNAi技术,能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的多药耐药.为化疗耐受的肿瘤细胞提供了新的基因治疗手段.