人肠道组织中CD3＋CD4＋T淋巴细胞分选方法的建立

摘要：目的建立一种准确且对细胞活性干扰少的分离人肠道组织中CD3＋CD4＋T淋巴细胞的分选方法。方法首先用消化酶分解人肠道组织，40μm细胞滤器过滤获得细胞悬液。Percoll连续密度梯度离心法分离细胞悬液收集单个核细胞，然后通过流式细胞仪分选法（FACS）分选单个核细胞中的CD3＋CD4＋T淋巴细胞。分选后的细胞采用细胞存活率、细胞纯度和形态观察对分选方法进行评价。结果消化酶能够很好地分解人肠道组织获得细胞悬液，Percoll连续密度梯度离心法收集的单个核细胞中CD3＋CD4＋T淋巴细胞纯度为（43．9±7．3）％，FACS分选后CD3＋CD4＋T淋巴细胞纯度为（96．9±1．2）％，差异有统计学意义（P〈0．01）。分选后的细胞存活率为（97．8±1．6）％，细胞的形态保持完整。结论Percoli连续密度梯度离心法联合FACS收集人肠道组织的CD3＋CD4＋T淋巴细胞纯度高，且对细胞形态和存活率影响小并可在无菌条件下进行，分选的细胞可继续用于其他功能的研究。