Separação de cistos de giardia SPP. Pela técnica de roberts-thompson para utilização em imunofluorescência indireta

Giardia lamblia, tambem conhecido por G. duodenalis e G. intestinalis, e um eucarioto flagelado unicelular, causador da infeccao parasitaria intestinal mais comum em todo o mundo. A doenca causada por este protozoario e conhecida por giardiase e um numero estimado de 280 milhoes de humanos sintomaticos sao infectados por ano, tendo sido considerada uma zoonose em 1979 e incluida como doenca negligenciada desde 2004 pela Organizacao Mundial da Saude (OMS). A deteccao do protozoario baseia-se na tecnica parasitologica de FAUST que necessita de pessoal treinado devido a confirmacao de positividade ser realizada atraves da observacao de cistos/trofozoitos ao microscopio, alem de serem comuns resultados falsos negativos, devido a liberacao intermitente nas fezes. Devido ao exposto, o objetivo deste trabalho foi separar cistos de Giardia spp. utilizando a tecnica de Roberts-Thompson, pois esta tecnica mantem a integridade morfologica dos cistos sendo a mais recomendada para a separacao de coproantigenos, para utilizacao em imunofluorescencia indireta. Uma femea de camundongo Balb/C, entre 6 e 8 semanas de idade, foi inoculada intraperitonealmente com uma suspensao de cistos inativados adicionada de 200�EL de adjuvante de Freund, totalizando 4 inoculos com intervalos semanais, para a obtencao de soro hiperimune. Amostras fecais humanas e animais foram submetidas a tecnica de Roberts-Thompson com modificacoes para a separacao de coproantigenos e estes utilizados para sensibilizar laminas de imunofluorescencia. 10 �EL de uma suspensao contendo 1,9 x 105 cistos por mL foi depositada em cada cavidade das laminas e o soro hiperimune obtido foi adicionado em diferentes diluicoes, seguido de anticorpo anti-camundongo conjugado a Fluoresceina (FITC). As laminas foram observadas em microscopio de fluorescencia. O soro hiperimune produzido detectou cistos separados atraves da tecnica de Roberts-Thompson na imunofluorescencia, tendo sido mantido intacto a morfologia cistica. Em virtude de detritos fecais terem permanecido na suspensao dos cistos, foi possivel observar reacoes inespecificas, mostrando ser necessaria a axenizacao dos cistos antes de utiliza-los como coproantigenos. Os resultados obtidos indicam que a producao de anticorpos especificos para Giardia spp. e uma alternativa para o diagnostico do patogeno atraves da padronizacao de tecnicas imunoquimicas, utilizando-se anticorpos monoclonais e policlonais especificos contra antigenos presentes em cistos e trofozoitos deste protozoario.