人B7-1／Sart3融合基因的克隆和表达

目的构建人共刺激分子CD80（B7-1）、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(Sart3）融合基因真核表达载体，并分别在原核和人成纤维细胞中表达.方法 采用RT-PCR技术，从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列(第1～1281 bp),此段序列包括已报道的能诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞的抗原表位.然后将不含终止密码子的B7-1cDNA和Sart3 cDNA共克隆入真核表达载体pEGFP-N1,测定核苷酸序列确定重组成功后，分别转染大肠杆菌和人成纤维细胞，利用流式细胞仪和Western blot检测B7和Sart3的表达.结果构建人B7、Sart3融合基因真核表达载体B7Sart3/pEGFPN.测序结果与GenBank的B7、Sart3相应序列(NM_005191、NM_014706)一致，阅读框无改变.流式细胞仪测定发现在转染的人成纤维细胞表面有明显的荧光增强，免疫印迹发现融合蛋白可以与抗B7抗体反应,融合蛋白分子量与B7-Sart3-EGFP的预测分子量相当.结论成功构建真核表达载体B7Sart3/pEGFPN，并在人成纤维细胞中表达.为下一步研究将SART3蛋白作为肿瘤疫苗应用于骨肉瘤的生物治疗打下基础.