抗菌肽Cecropin D在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定

目的在毕赤酵母GS115中表达抗菌肽Ceempin D，并检测其抗菌活性。方法根据毕赤酵母密码子的偏爱性，人工合成6条寡聚核苷酸片段，经磷酸化、退火、连接并克隆人酵母表达载体pPIC9K。重组表达质粒pPIC9K-D转化至毕赤酵母菌GS115，经G418筛选，阳性高拷贝克隆用0．5％的甲醇诱导表达，表达产物经CM—Sepharose层析柱纯化，Tricine-sDS．PAGE分析，琼脂糖扩散法和比浊法测定其抗菌活性。结果经Tricine-SDS-PAGE检测，在相对分子质量3900左右处可见目的蛋白表达条带，纯化后的目的蛋白纯度达90％以上，获得的抗菌肽Ceeropin D对一些革兰阳性菌和革兰阴性菌均有抑菌活性。结论抗菌肽Ceeropin D成功地在毕赤酵母中分泌表达，为以后深入研究抗菌肽奠定了基础。