牙鲆( Paralichthys olivaceus ) CD59 基因的原核表达与功能探究

本研究分析了 CD59 基因在牙鲆( Paralichthys olivaceus )感染鳗弧菌( Vibrio anguillarum )前后的表达模式。结果显示，感染前， CD59 基因在检测的4种免疫器官中均不表达；感染后，该基因均有不同程度的表达，其中，肾脏的表达量最高。对牙鲆 CD59 基因进行原核表达，构建原核表达载体pET-32a- CD59 ，并将其转化入大肠杆菌( Escherichia coli ) BL21，使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导，获得约为29 kDa的重组蛋白pET-32a-CD59。该蛋白以包涵体形式存在，通过His亲和层析柱纯化和超滤管浓缩目的蛋白后，经SDS-PAGE检测得到单一条带，纯化效果较好。Western blotting分析结果显示，重组蛋白pET-32a-CD59可以与抗His单克隆抗体发生特异性反应，说明牙鲆 CD59 基因在大肠杆菌系统中成功表达。对重组蛋白进行透析复性，复性结束后，蛋白无析出或絮状沉淀，初步表明复性成功。选取嗜水气单胞菌( Aeromonas hydrophila )、鳗弧菌、金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus )和大肠杆菌4种致病指示菌，测定复性重组蛋白pET-32a-CD59的抑菌活性。研究表明，重组蛋白pET-32a-CD59对嗜水气单胞菌具有一定的抑菌活性。本研究旨在探究牙鲆免疫调节机制，并为提高牙鲆养殖效率提供一定的分子理论基础。