营养剥夺诱导髓核细胞Bcl-2/ 腺病毒干扰蛋白3 表达及线粒体转位的实验研究

【摘 要】 目的 通过营养剥夺模拟体内髓核细胞退变微环境，检测Bcl-2/ 腺病毒干扰蛋白3（Bcl-2/adenovirusE1B 19-kDa-interacting protein 3，BNIP3）表达及线粒体转位情况，为进一步探索髓核细胞退变死亡机制提供实验依据。 方法 成年清洁级SD 大鼠2 只，雌雄不限，体重150 ～ 200 g。体外分离获取鼠尾椎间盘髓核细胞，将传代后细胞分别置入正常环境（对照组：L-DMEM 培养基、10%FBS、21%O2）和营养剥夺环境（实验组：DMEM 无糖无血清培养基、 1% O2）培养24、48、72 h 后，实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光染色及Western blot 检测BNIP3 基因及蛋白表达，流式细胞仪检测凋亡率及线粒体膜电位。 结果 实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光染色及Western blot 检测显示对照组细胞低表达BNIP3；实验组随培养时间延长，BNIP3 表达呈上升趋势，且BNIP3 与线粒体相结合；除培养后24 h 实验组BNIP3 基因表达与对照组比较差异无统计学意义（P gt; 0.05）外，其余各时间点实验组BNIP3 基因及蛋白表达与对照组比较差异均有统计学意义（P lt; 0.05）。流式细胞仪检测显示，对照组细胞凋亡率较低，且细胞保持较高的线粒体膜电位；而实验组随培养时间延长细胞凋亡率增加、线粒体膜电位降低，与对照组比较差异均有统计学意义（P lt; 0.05）。 结论 营养剥夺可能通过诱导BNIP3 表达增加并结合线粒体导致线粒体功能障碍，最终导致髓核细胞死亡。