Análise da metilação de DNA em RASSF1A e RASSF1C em linhagens celulares derivadas de câncer de mama

O câncer de mama e o tipo de câncer mais comum entre as mulheres no mundo todo, configurando um importante problema de saude publica. Alteracoes geneticas e epigeneticas contribuem para o processo de carcinogenese, e um dos eventos epigeneticos mais estudados e a metilacao de DNA, sendo a hipermetilacao associada a repressao transcricional de genes. O gene RASSF1 e responsavel por codificar sete transcritos, sendo a isoforma RASSF1A normalmente expressa e associada ao controle do ciclo celular, estabilizacao de microtubulos, motilidade, adesao e apoptose. O silenciamento de RASSF1A por hipermetilacao de DNA e frequentemente observado no câncer. Ja outro transcrito de RASSF1, RASSF1C, foi relacionado a atividades opostas as de RASSF1A, sendo associado a atividades oncogenicas. O objetivo deste estudo foi investigar o padrao de metilacao de duas ilhas CpG (uma associada a RASSF1A e outra a RASSF1C) em 17 linhagens celulares derivadas de câncer de mama (amostras tipo 1) e 3 linhagens celulares nao-tumorigenicas de epitelio mamario (amostras tipo 2), e tambem analisar a expressao relativa dos transcritos nas mesmas amostras. Foram utilizados pares de primers especificos para detectar alelos metilados e nao-metilados atraves da tecnica de MS-PCR, apos tratamento com bissulfito de sodio. Os niveis de expressao relativos dos dois trancritos de RASSF1 foram determinados por RT-PCR, sendo as analises conduzidas por testes nao-parametricos de Kruskal-Wallis (extensao do teste de Wilcoxon-Mann-Whitney), considerando como 5% o nivel de significância. Apenas uma das amostras tipo 1 mostrou perfil nao-metilado da ilha CpG associada a RASSF1A, duas apresentaram padroes metilado e nao-metilado, bem como as 3 amostras do tipo 2, e todas as amostras apresentaram perfil nao-metilado para a ilha CpG associada a RASSF1C. A analise de expressao de transcritos monstrou que apenas duas amostras tipo 1 expressaram RASSF1A e todas as amostras expressaram RASSF1C. Quando comparado a celulas epiteliais normais, o nivel de expressao de RASSF1C encontrado foi aumentado em pelo menos 2 vezes em cinco amostras tipo 1. Foi possivel concluir que RASSF1C nao esta envolvido em atividade supressora tumoral, podendo apresentar atividade oncogenica. Para melhor caracterizacao de RASSF1C sao necessarios estudos adicionais que busquem uma correlacao do nivel de expressao deste gene com diversas linhagens tumorais em diferentes situacoes de estadiamento. Agencia financiadora: CAPES e FAPESP Descritores: Gene RASSF1; Epigenetica; Câncer de Mama; Regulacao Genica.