Recherche de marqueurs cytologiques et biochimiques de la differenciation embryogene et caulogene dans des feuilles d'une chicoree hybride

Nous avons pu montrer au cours de ce travail sur la morphogenese dans des feuilles isolees de l'hybride 474 de chicoree que la temperature avait un role discriminatoire sur l'orientation de la morphogenese. A 35c, des cellules reactivees sont observees des le 4eme jour. Les embryons somatiques d'origine unicellulaire se differencient des le 7eme sur les bordures des incisions. A 25c, on observe a partir du 5eme jour la mise en place d'un cal important sur lequel se differencient des bourgeons ; des embryons somatiques d'origine indirecte se differencient tardivement dans le cal. L'analyse en microscopie electronique a balayage a permis de mettre en evidence specifiquement a la surface des embryons somatiques un reseau fibrillaire qui n'est plus detecte lorsque ces embryons sont epidermises. L'analyse des proteines excretees dans les milieux de culture, a permis de mettre en evidence des proteines specifiquement exprimees au cours de la differenciation embryogene et de verifier l'etroite liaison notee par helleboid et coll. (1998) entre la presence de -1,3-glucanases et l'embryogenese somatique. L'analyse des proteines intratissulaires par electrophorese bidimensionnelle apres coloration argentique et marquage in vivo a permis de mettre en evidence quatre proteines particulieres (22, o 16, e 17a, e 17b). La proteine 22 est synthetisee en conditions embryogenes (35c) des le 3eme jour de culture et en conditions organogenes (25c) au 10eme jour de culture. Elle a ete identifiee comme appartenant a la famille des proteines de choc thermique de faible poids moleculaire et pourrait etre impliquee dans le processus embryogene. Le polypeptide o 16 uniquement detecte a 25c a partir du 5eme jour de culture pourrait etre relie aux processus de callogenese ou de neotracheogenese plutot qu'a celui d'organogenese. Les proteines e 17a et e 17b sont detectees a partir du 5eme jour dans les feuilles de 474 orientees vers un programme embryogene. Elles constituent de bons candidats au titre de marqueurs de l'embryogenese somatique. Leur identification devrait permettre de progresser dans la comprehension de ce processus.