DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE HEMOPLASMAS EM MACACOS ALOUATTA DE CATIVEIRO NO ESTADO DE SÃO PAULO

Hemoplasmas sao bacterias que parasitam a superficie das hemacias e afetam numerosas especies de animais, incluindo os seres humanos. Objetivou-se caracterizar molecularmente amostras de DNA de Mycoplasma spp. de macacos bugios Alouatta spp. de cativeiro no Estado de Sao Paulo, por meio de ensaios de PCR convencional (cPCR).  Este trabalho foi aprovado pelo (SISBIO, 51662-2) e Comite de Etica do Uso de Animais (5.595/16). Amostras de sangue foram colhidas da veia cefalica em tubos de ensaio com EDTA de 46 macacos bugios, de diferentes localidades.  O DNA foi extraido a partir de 200 µL de cada amostra de sangue, com o Kit DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen, Valencia, California, USA), de acordo com o fabricante. Para deteccao e caracterizacao de Mycoplasma spp. foram utilizados dois conjuntos de oligonucleotideos iniciadores, HemMycop16S-41s (5’- GYATGCMTAAYACATGCAAGTCGARCG-3’), HemMyco16S-938as (5’-CTCCACCACTTGTTCAGGTCCCCGTC-3’), sendo o segundo conjunto, HemMycop 16S-322s (5’-GCCCATATTCCTACGGGAAGCAGCAGT-3’), HemMycop16S-1420as (5’-GTTTGACGGGCGGTGTGTACAAGACC-3’), ambos amplificam um fragmento de 800 bp do gene 16S rRNA. A reacao de amplificacao foi realizada com volume final de 25µL contendo 5 µL da amostra de DNA, tampao 10x (50 mM de KCl, Tris-HCl 10) (Invitrogen® Carlsbad, California, EUA), 1,0 mM MgCl 2 (Invitrogen® Carlsbad, California, EUA), 2,0 µmol de dNTPs (Invitrogen®), 1,5 U de Taq Polimerase (Invitrogen® Carlsbad, California, EUA), e 0,3 µM de cada oligonucleotideo iniciador (Sintese Biotecnologia LTDA- PPE, Brasil). As duas reacoes foram realizadas nas seguintes condicoes: 95oC por 2 minutos, seguidos por 55 ciclos de 94oC por 15 segundos, 68oC por 15 segundos e 72oC por 18 segundos, seguido por uma extensao final a 72oC por 1 minuto. Dos animais avaliados, 16 (34%) mostraram-se positivos para Mycoplasma spp. Pode-se observar que hemoplasmas circulam em primatas dentro do Estado de Sao Paulo e que futuros estudos devem ser conduzidos a fim de investigar o potencial patogenico destes agentes.