Adenovirus mediated antisense c-myc gene on the chemotherapy sensitivity of osteosarcoma cells to cisplatin

目的 构建表达反义c-myc的重组腺病毒,探讨重组腺病毒介导反义c-myc转染的人骨肉瘤MG-63细胞对顺铂化疗敏感性的影响. 方法应用基因重组技术,将约720bp的人c-myc cDNA反向克隆到腺病毒载体,经重组、扩增、病毒包装后构建表达反义c-myc的重组腺病毒(Ad-Asc-myc),并在体外转染骨肉瘤MG-63细胞,采用瑞士染色、吖啶橙染色、蛋白免疫印迹(Western Blot)、细胞体外增殖抑制试验(MTT)、流式细胞仪(FCM)等观察细胞形态、检测c-myc蛋白表达、瘤细胞体外增殖抑制、凋亡及细胞周期,分析Ad-Asc-myc体外转染的骨肉瘤MG-63细胞对顺铂化疗敏感性.结果成功构建Ad-Asc-myc,滴度可达2×109pfu/ml,体外转染MG-63细胞48 h后,可降低c-myc蛋白表达,并与浓度为2.0、5.0 μg/ml的顺铂作用2 h后 ,可抑制MG-63细胞的体外增殖,抑制率分为33.4%、54.2%,与对照腺病毒(Ad-LacZ)转染组相比差异有统计学意义(P<0.05),FCM检测证实Ad-Asc-myc的转染可诱导骨肉瘤细胞凋亡,且顺铂治疗后凋亡比例增加,细胞周期分析显示Ad-Asc-myc转染的骨肉瘤细胞出现G2/M期阻滞.结论腺病毒介导反义c-myc 能诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡并增加MG-63细胞对顺铂化疗敏感性。