一种基于M基因的尼帕病毒TaqMan-MGB荧光RT-PCR检测方法的建立

为建立一种快速、敏感和特异地检测尼帕病毒（Nipah virus,NiV）的方法,根据NiV M基因序列保守区设计了1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测NiV的TaqMan-MGB实时荧光RT-PCR方法,并对该方法进行特异性、定量线性范围、敏感性和重复性等试验。结果显示,该方法仅对NiV M基因的RNA标准对照（NiV-M-RNA）发生特异性扩增反应,对猪的其他常见病毒,包括经典猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪流感病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型均不发生交叉反应。该方法对NiV-M-RNA的最适线性检测范围为4.6×101~4.6×107 copies/μL,标准曲线方程为y=-3.418x＋37.57,线性相关系数（r2）为0.999,检测下限为4.6copies/μL。对5个不同浓度（4.6×103~4.6×107 copies/μL）的NiV-M-RNA进行双份样品的4次重复检测,每个浓度重复试验的Ct值的变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。用该方法对368份临床样品进行NiV检测,结果均为阴性。本方法的建立为活猪临床样品中NiV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。