粘帚霉GR-6 菌株种类鉴定及其β-1,3-葡聚糖酶纯化与酶学性质

为明确粘帚霉GR-6 产生的β-1, 3-葡聚糖酶对植物病原真菌的作用机制,建立β-1, 3-葡聚糖酶分离纯化体系,根据形态特征和ITS 序列分析鉴定GR-6 种类, 用60%饱和度的丙酮沉淀酶蛋白质,再通过DE-52 离子交换层析和Sephadex G-75 凝胶柱层析纯化蛋白质。结果表明,GR-6 菌株ITS 序列与粉红粘帚霉的相似度最高,达到98%,结合形态学特征将该菌株鉴定为粉红粘帚霉。SDS-PAGE 显示纯化后得到一种分子量为4. 11×10^4 的蛋白质,该蛋白质具有β-1, 3-葡聚糖酶活性。经该酶处理后的水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani）和棉花黄萎病菌（Verti-cilliun dahliae）菌丝颜色变浅、细胞轮廓变模糊、甚至菌丝细胞逐渐消失,可见,粉红粘帚霉GR-6 产生的β-1, 3-葡聚糖酶对这两种植物病原真菌菌丝有直接破坏作用。纯化后的β-1,3-葡聚糖酶的最适反应温度为50 ℃,最适反应pH 值为4,酶液在50 ℃以下或pH 5 时保存0.5 h,酶活性基本保持稳定;该葡聚糖酶对一些金属离子较敏感,其中Zn2 ＋ 、Sn2 ＋ 、Ca2 ＋ 、Fe2 ＋等使酶活性显著降低,而Mn2 ＋和K＋对酶活性没有明显的影响。建立的β-1,3-葡聚糖酶纯化体系稳定可靠。