Évaluation de la réponse proinflammatoire et angiogénique de cellules alvéolaires exposées à un extrait de fumée de cigarette

Le processus angiogenique dans le developpement tumoral est la resultante de l’activation de cellules tumorales, synthetisant le VEGF («  Vascular Endothelial Growth Factor  »), de cellules inflammatoires du stroma tumoral synthetisant des metalloproteinases, et de cellules endotheliales, cibles du VEGF. Notre etude a pour objectif general de mieux comprendre les mecanismes precoces impliques dans les reponses proinflammatoire et angiogenique apres une exposition de cellules de type alveolaire a un extrait de fumee de cigarette. Des cellules epitheliales (lignee A549) ou des macrophages (lignee U937 differenciee par du PMA pendant 72 heures) sont incubees pendant 24 heures avec differentes dilutions (1/10, 1/25, 1/50, 1/ 100 et 1/250) d’un extrait de fumee de cigarette (CSE) obtenu par la mise en contact de la fumee de 2 cigarettes 1R3 (Universite Kentucky, USA) avec le milieu de culture. Les cellules U937, differenciees en macrophages, sont privees de PMA pendant 6 heures. Dans une autre serie d’experiences, le surnageant des cellules U937 differenciees en macrophages et stimulees par le CSE, est collecte puis centrifuge. Cinq cents microlitres de surnageant sont deposes dans chacun des puits d’A549. Les productions d’interleukine-8 (IL-8), de VEGF sont mesurees par ELISA, de gelatinase B (MMP- 9) par zymographie et de metalloelastase (MMP-12) par western- Blot. Un dosage semi-quantitatif de marqueurs d’angiogenese a ete effectue par des macropuces a proteines (Protein array, Ray-Biotech). Enfin, la mesure des ARNm est realisee par PCR quantitative (Q-PCR) sybr green. Une induction de l’expression des genes codant pour l’IL-8, le VEGF et la MMP-12 est mise en evidence par les cellules U937 apres exposition au CSE dilue au 1/25 et 1/50, ainsi qu’une liberation accrue d’IL-8 et de VEGF dans le surnageant de culture. Nous n’avons pas observe d’augmentation de l’expression de genes pour la MMP-9 ni de production par zymographie. Les cellules A549 ne sont pas activees par le CSE, mais elles le sont par le surnageant de culture des macrophages. Apres une incubation de 24 heures avec ce surnageant, une induction de l’expression des genes codant l’IL- 8 et le VEGF est mise en evidence. Cette etude montre que l’activation de macrophage par le CSE entraine la production de mediateurs inflammatoires comme l’IL-8 et de facteurs angiogeniques comme le VEGF Ces resultats suggerent que le macrophage alveolaire est la premiere cellule stimulee par la fumee de cigarette et la cellule epitheliale est activee secondairement par le macrophage.