Caracterización de la estructura primaria de la interleucina-2 humana recombinante

La interleucina-2 humana recombinante clonada y expresada en E. coli, y purificada mediante cromatografia liquida de alta eficacia (HPLC), fue analizada para verificar su estructura primaria. El analisis de aminoacidos de la proteina pura coincide con la composicion teorica esperada. La proteina fue hidrolizada con bromuro de cianogeno, los peptidos separados por HPLC fueron secuenciados automaticamente y determinada su composicion aminoacidica, confirmandose la estructura desde el extremo N-terminal hasta el residuo 56. Con el proposito de completar la secuencia de la proteina, esta fue reducida y carboximetilada. La proteina se sometio a digestion con endoproteinasa GLU-C (Staphyloccocus aureus V8) y una parte de esta digestion se incubo a continuacion con tripsina. Los peptidos purificados mediante gel filtracion (Biogel P-6) y HPLC en fase inversa, fueron secuenciados con la tecnica manual de doble acoplamiento con dimetilaminoazobenzeno isotiocianato e isotiocianato de fenilo (DABITC/PITC). La purificacion de la digestion triptica de la proteina reducida y carboximetilada mediante fase inversa, suministro los peptidos para analisis en espectrometria de masas utilizando como fuente de ionizacion bombardeo con atomos rapidos (MS FAB). Tanto los resultados de la secuenciacion como la espectrometria de masas confirman que la interleucina-2 obtenida en E. coli posee la estructura primaria reportada para esta proteina