铁皮石斛 DoSMT2 基因的克隆与表达分析

为了解SMT2基因在铁皮石斛（Dendrobium officinale）甾醇代谢过程中的作用，利用RACE技术克隆到1个DoSMT2基因，开放阅读框为1 089 bp，编码362个氨基酸，DoSMT2相对分子量为40.345 kD，理论等电点为8.13，属于稳定的亲水性蛋白。经BLAST P检索，DoSMT2蛋白属于AdoMet-MTases超级家族，含有4个S-腺苷蛋氨酸结合位点、1个甲基转移酶保守结构域和1个甾醇甲基转移酶C末端保守结构域。系统进化分析表明，DoSMT2与深圳拟兰（Apostasia shenzhenica）的SMT2亲缘关系最近，确定其属于SMT2家族。qRT-PCR分析结果表明，DoSMT2基因在茎和叶都能表达，10月份的表达量最高，叶片的表达量显著高于茎，推断叶片的甾醇代谢比茎活跃。构建了pET-29a-DoSMT2原核表达载体，并转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达出预期大小的蛋白。这为铁皮石斛DoSMT2的甲基化机制及甾醇化合物代谢研究奠定基础。