Biomarqueurs cellulaires circulants de la dysfonction endothéliale : détection et potentiel vasculaire

Dans la dysfonction endotheliale, le compartiment endothelial circulant joue simultanement le role d’acteur implique dans la regeneration du tissu lese et celui d’indicateur de l’etat d’alteration ou de regeneration de l’endothelium. Dans l’arterite obliterante des membres inferieurs (AOMI), l’un des axes de recherche porte sur le developpement d’un produit de therapie cellulaire capable d’induire la formation de neo-Vaisseaux. Face a la difficulte d’obtenir et d`amplifier des cellules progenitrices endotheliales (CPE) chez l’adulte sain, et a fortiori chez le patient, l’une des hypotheses laisse envisager le recours a d’autres types cellulaires ayant des proprietes vasculogeniques. Chez patients atteints de maladies cardiovasculaires, et d’AOMI en particulier, les cellules mononuclees de moelle osseuse et les CPE montrent des proprietes angiogeniques diminuees. Nous avons mis en evidence la capacite des cellules souches mesenchymateuses (CSM) isolees de patients atteints d’AOMI a induire une reperfusion, par recrutement de cellules endotheliales in situ, avec la meme efficacite que celles de donneurs sains. Les CSM ne se differencient pas en cellules endotheliales mais agissent par paracrinie. La seconde hypothese d’obtention d’un produit de therapie cellulaire autologue angiogene est de trier des cellules plus immatures que les CPE afin de les differencier secondairement vers la lignee endotheliale a l’image du modele pathologique de la cellule souche d’hemangiome CD133+ qui laisse envisager les Very Small Embryonic Like stem cells (VSEL), cellules souches multipotentes CD133+, comme un candidat de cellules post-Natales a potentiel vasculaire. Nous avons derives, en culture en conditions angiogeniques, des VSEL qui acquierent un phenotype mesenchymateux mais presentent un profil secretoire proche de celui des CPE. Les VSEL favorisent la revascularisation post-Ischemique et acquierent un phenotype endothelial in vitro et in vivo suggerant que les VSEL peuvent etre a l’origine de la lignee endotheliale. Les VSEL se presentent egalement comme un biomarqueur de la dysfonction endotheliale mobilise de la moelle osseuse (MO) vers le sang peripherique (PB) chez les patients souffrant d’AOMI. Les biomarqueurs cellulaires circulants representent non seulement des marqueurs non invasifs de l’endothelium mais peuvent egalement apporter des informations utiles pour le diagnostic, le pronostic et le suivi therapeutique des patients souffrant de pathologies associees a une dysfonction endotheliale. Une modification du nombre de CPE et de cellules endotheliales circulantes (CEC) dans la circulation a ete rapportee dans differentes situations pathologiques respectivement associees a une regeneration et une alteration endotheliale telle l’augmentation du taux de CEC chez des patients presentant une hypertension arterielle pulmonaire (HTAP). La technique de reference pour le denombrement des CEC dans le sang peripherique est l’immunoseparation magnetique (IMS). Cette methode non automatisee et chronophage, repose sur l’enumeration par microscopie a fluorescence des cellules CD146+ prealablement isolees. Bien que reproductible, cette numeration est soumise a de nombreux biais de quantification, difficile a mettre en oeuvre et sujette a interpretation. La mise au point d’une methode de detection automatisee des CEC par cytometrie a focalisation acoustique (AFC) s’est montree fiable et robuste, dans une cohorte de patients atteints d’HTAP traitee ou non, constituant une alternative pertinente a l’analyse par microscopie. L’ensemble de ces travaux ouvre donc de nouvelles perspectives dans la detection des biomarqueurs cellulaires circulants impliques dans la dysfonction endotheliale, proposant les VSEL comme nouvel acteur vasculogenique.