小熊猫 IL-17的克隆及原核表达

为制备小熊猫白介素17（IL-17）表达产物，提取活化的小熊猫外周血单个核细胞总 RNA，合成cDNA，以此为模板克隆 IL-17的成熟肽编码序列，将其重组到原核表达载体 pET-32a，并将其转入到 BL-21（DE3）中，进行序列分析。重组载体经 IPTG 诱导表达，表达产物经镍柱纯化。结果显示，小熊猫 IL-17的CDS 区由462 bp 组成，含23个氨基酸组成的信号肽，重组 IL-17由130个氨基酸组成。SDS-PAGE 显示，原核表达产物在诱导温度25℃，IPTG 浓度0．5 mmol/L，诱导时间20 h 的条件下，能够获得最佳表达。