人骨髓间质干细胞分离、培养、分化和鉴定方法的研究

目的探讨人骨髓间质干细胞（hMSCs）分离和体外培养的适宜条件,检测其多向分化的能力。方法应用细胞生物学干细胞培养法、分子生物学干细胞组织工程学等方法研究hMSCs的分离、培养并检测其多向分化潜能。结果hMSCs增殖能力在一定的范围内（2.5%～20%）随着血清浓度的增加而增大,20%的血清浓度最适宜,其增殖活性在一定种植密度范围内（1～8×104/ml）随种植细胞数量增加而增高,在种植细胞密度为8×104/ml时,细胞的增殖活性最高。所分离、培养的hMSCs是纯的、可长期传代、扩增的稳定的细胞。hMSCs在成脂培养基中有脂肪细胞形成,苏丹Ⅲ染色法将脂肪细胞胞浆染成桔红色。在成软骨培养基中有软骨细胞形成,阿尔新蓝染色法将软骨结节样结构染为深蓝色。在成骨培养基中有成骨细胞形成,VonKossa染色法显示有黑色矿化结节形成。该细胞在特定的诱导培养条件下具有向脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞分化能力,符合判定hMSCs的＂金标准＂。结论所分离、培养的hMSCs是纯的、可长期传代、扩增并保持未分化状态的、稳定的细胞,其在体外诱导条件下可向脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞分化,是一种具有多向分化潜能的细胞。