Detecção da proteína p53 em células leucêmicas por citometria de fluxo e imunocitoquímica

Introducao: A proteina p53 desempenha uma funcao crucial no controle do ciclo celular, reparo do DNA e na inducao de apoptose em celulas geneticamente instaveis. A imunocitoquimica (ICQ) e um dos metodos preconizados para deteccao e visualizacao dessa proteina no nucleo das celulas, sendo, no entanto um metodo demorado e trabalhoso o que dificulta a sua aplicacao na rotina laboratorial. Atualmente, a citometria de fluxo (CF) tambem tem sido empregada na deteccao da proteina p53 mutada ou estabilizada tendo a vantagem da praticidade e rapidez de execucao. Objetivos e Metodologia: Comparar os resultados obtidos pela CF e ICQ na deteccao da proteina p53 em celulas leucemicas. Empregamos amostras de 10 pacientes com leucemia linfoide aguda (LLA) 10 com leucemia linfoide cronica (LLC), tendo sido tambem empregadas, celulas de linhagens leucemicas humanas que serviram como controle de expressao positiva e negativa para ambos os metodos alem de linfocitos de 40 doadores de sangue. A CF e ICQ foram realizadas apos a marcacao com anticorpo monoclonal anti-p53 por tecnicas convencionais. Resultados: Observamos concordância nos resultados da maioria das amostras dos pacientes e em todas as amostras das linhagens elulares tendo sido, no entanto constatados niveis de expressao mais elevados nas analises obtidos pela CF quando comparados com a ICQ, refletindo em uma maior sensibilidade desse metodo. Conclusao: Apesar da ICQ ser considerada uma tecnica adequada para a deteccao da p53, nossos resultados indicam que a CF pode ser empregada satisfatoriamente na deteccao dessa proteina em amostras de celulas leucemicas. Introduction: The p53 protein plays a crucial role in the cell cycle control, DNA damage repair and induction of apoptosis in genetically unstable cells. The immunocytochemistry (ICQ) is one of the most common methodology for detection and visualization of this protein in the nucleus of the cells, but this technique is time-consuming and difficult to apply in the clinical setting. Nowadays the assessment of p53 protein expression by flow cytometry (FC) assays are easier to perform and provide reliable estimates of the prolonged half-life of mutant or inactivated wild-type p53 protein. Objectives and Methodology: Compare the results of p53 detection by FC and ICQ in leukemic cells. We used samples from 10 patients with acute lymphoid leukemia (ALL), 10 with chronic lymphoid leukemia (CLL). To positive and negative controls of p53 expression in both methods we also employed leukemic cells from human leukemic cell lines an lymphocytes from 40 healthy donors were also used as control for negative labeling in FC. The FC and ICQ were performed after labeling with p53 monoclonal antibody by the usual protocol. Results: We verified an agreement in the results in the majority of the leukemic cells from patients and in all human leukemic cell line samples. Conclusion: Despite of ICQ is considered a good methodology for p53 detection in leukemic cells; our results show that FC can be satisfactorily used for detection of this protein in leukemic cells.