人膀胱癌荷瘤鼠中shRNA沉默△Np63基因对肿瘤的抑制和cyclin D1表达的影响

目的利用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术沉默△Np63基因的表达，研究其对人膀胱癌裸鼠皮下移植模型的抑瘤作用，同时检测△Np63基因被抑制后对细胞周期素D1（cyclin D1）表达的影响。方法建立人膀胱癌裸鼠皮下移植模型，构建△Np63基因特异性shRNA（short hairpin）表达质粒，将表达质粒转染荷瘤鼠瘤体。将符合实验条件的15只裸鼠分为3组：△Np63-shRNA组、Control—shRNA组与生理盐水组，每组5只。观察各组肿瘤生长情况、瘤组织超微结构的改变，检测△Np63基因和蛋白、增殖细胞核抗原（PCNA）和cyclin D1蛋白表达的变化。结果转染质粒8周后，△Np63-shRNA组与生理盐水组瘤体积有显著性差异（P〈0．01），抑瘤率为74．44％，Control—shRNA组与生理盐水组体积无显著性差异（P〉0．05）。病理结果显示△Np63-shRNA组肿瘤生长受到抑制，细胞核分裂象减少，可见大量肿瘤细胞坏死和凋亡、炎症细胞浸润。RT—PCR结果显示△Np63-shRNA组△Np63基因表达降低。免疫组化结果显示△Np63、PCNA、cyclin D1蛋白表达均降低。结论△Np63特异性shRNA质粒表达载体沉默△Np63基因后，可显著抑制人膀胱癌裸鼠肿瘤的生长，△Np63可能通过抑制cyclin D1的表达而抑制肿瘤的细胞增殖。