Formats de détection de produits d'amplification PCR : application à la mise en évidence du provirus VIH-1

La reaction de polymerisation en chaine (polymerase chain reaction ou pcr) est devenue un outil indispensable dans les laboratoires de biologie moleculaire. Certaines applications notamment en diagnostic medical, exigent une specificite et une sensibilite maximale. Les formats employes doivent etre simples et compatibles avec une utilisation en routine de cette technique. Dans ce travail, nous presentons la mise au point d'un test diagnostic (amplicis ) base sur la pcr. Ce procede, qui permet une amelioration de la specificite et de la sensibilite du processus d'amplification, exploite les possibilites de modifications chimiques des oligonucleotides de synthese, pour aboutir a des systemes de revelation specifiques isotopiques ou colorimetriques, sur phase solide (tubes). La revelation colorimetrique est amelioree, grace a l'utilisation d'un conjugue anticorps monoclonal-enzyme. Amplicis isotopique est ensuite adapte a la mise en evidence du provirus du vih 1 chez des patients seropositifs. Pour cette application, nous proposons une simplification des protocoles de preparation des echantillons sanguins. Une validation de tout le processus est realisee chez des enfants nes de mere seropositive ; les resultats sont compares avec les techniques classiques de mise en evidence de l'infection chez les nouveaux-nes. Nous proposons par ailleurs un format nouveau pour la quantification, a travers une approche chimique de la mesure differentielle de deux signaux sur phase solide. Ce concept est applique a la quantification de l'oncogene c-myc dans des lignees cellulaires par co-amplification de la cible et d'un standard interne. Toutes ces etudes sont realisees avec un objectif de standardisation des essais, pour une diffusion en toute securite de ce type de tests