Testes moleculares baseados em amplificação isotérmica mediada por Loop para detecção de arbovírus em microdispositivos descartáveis

Os virus da dengue (DENV) e da zika (ZIKV) sao arbovirus transmitidos aos seres humanos atraves da picada de mosquitos do genero Aedes, sendo que as infeccoes causadas por estes arbovirus apresentam sintomas semelhantes e muitas vezes reacoes cruzadas nos testes diagnosticos. A incidencia desses virus e majoritariamente em locais de recursos escassos, nos quais nem sempre ha infraestrutura laboratorial sofisticada e profissionais especializados para realizar um diagnostico preciso, confiavel e diferencial. Nesse sentido, surge a necessidade de metodos diagnosticos que sejam simples de serem realizados, economicamente viaveis, de alta confiabilidade e que permitam que o diagnostico seja feito no proprio local de necessidade (point-of-care-tests, POCT). Neste trabalho, foram desenvolvidos dois metodos para a deteccao dos virus da dengue e zika a partir de amostras reais de pacientes infectados atraves da reacao de transcricao reversa seguida da amplificacao isotermica de DNA mediada por loop (RT-LAMP) em um microdispositivo descartavel de poliester-toner (PeT). As reacoes foram controladas termicamente com um termobloco e em 10 min foi possivel detectar o ZIKV e em 15 min o DENV. A deteccao foi feita ao final do periodo de incubacao ou por eletroforese em gel (deteccao off-chip) ou por deteccao visual no chip (deteccao on-chip) atraves da adicao de intercalador de DNA. Os resultados demonstraram que e possivel detectar o virus da dengue e da zika atraves de uma reacao de RT-LAMP diretamente nas amostras dos pacientes infectados com os virus, sem a necessidade de uma etapa de extracao previa de RNA. O sucesso da RT-LAMP foi confirmado em reacoes iniciadas com 200 copias de RNA μL-1 para o DENV e com 0,2 copias de RNA μL-1 para o ZIKV. A RT-LAMP realizada no microdispositivo de PeT demonstrou ser um metodo simples e de baixo custo que permitiu a deteccao rapida dos virus com alta confiabilidade e com grande potencial para aplicacoes nas situacoes de point-of-care.