Vectorisation de molécules biologiques dans Candida albicans grâce au peptide de transduction MD-ZEBRA

Introduction L’identification de nouvelles cibles pour le developpement de therapies antifongiques efficaces et non toxiques pour les cellules humaines reste un defi majeur. De plus, la paroi et la membrane fongique constituent des obstacles a l’internalisation de molecules inhibitrices. Nous avons developpe a partir du facteur de transcription ZEBRA du virus Epstein-Barr un peptide de penetration cellulaire nomme MD. Nous avons montre precedemment que MD etait capable de traverser la membrane cellulaire des cellules eucaryotes et de favoriser l’internalisation de molecules cargos auxquelles il etait fusionne [1] . Objectifs de l’etude Montrer que le peptide MD possede la capacite de traverser la paroi et la membrane de Candida albicans et qu’il permet de vehiculer efficacement des proteines dans le cytoplasme. Methodes Des proteines recombinantes, contenant la sequence de penetration cellulaire fusionnee a la proteine reportrice eGFP, ont ete produites dans un systeme procaryote et ensuite purifiees par chromatographie d’affinite. L’internalisation dans C. albicans a ete verifiee par microscopie confocale et la cinetique a ete analysee par FACS. Apres internalisation des proteines recombinantes, la viabilite cellulaire a ete evaluee par des mesures de CFU et OD600 nm. Resultats L’analyse par microscopie confocale demontre que le peptide MD est capable de traverser la paroi et la membrane cellulaire et de transferer la proteine eGFP dans le cytoplasme de la levure. Le processus d’internalisation est concentration – et temps – dependant. Apres 2 heures d’incubation avec les proteines recombinantes, environ 70 % des levures apparaissent et la fluorescence est detectee jusqu’au centre du cytoplasme. Aucun effet toxique n’est associe au processus d’internalisation [2] . Conclusion Le peptide MD represente un nouveau systeme de vectorisation de proteines dans C. albicans . Les resultats obtenus ouvrent de nouveaux champs d’investigation pour l’utilisation de ce systeme dans la validation de nouvelles strategies therapeutiques ainsi que pour des analyses fonctionnelles de la pathogenicite de C. albicans .