Etude fonctionnelle des marqueurs pronostiques CD81 et ABCB1 dans les leucémies aiguës myéloïdes

La leucemie aigue myeloide (LAM) est une hemopathie heterogene. La stratification therapeutique repose sur les anomalies cytogenetiques et moleculaires. Les rechutes, probablement liees aux cellules souches leucemiques (CSL) sont dans la majorite des cas difficiles a predire. Mon travail de these a consiste en l’etude de deux marqueurs de mauvais pronostic, lies aux CSL :1/ ABCB1, membre de la famille des transporteurs ATP Binding Cassette, connu pour son implication dans la chimioresistance et2/ CD81, une tetraspanine, pour laquelle nous avons demontre l’impact pronostique dans les LAM. Methodes1/ ABCB1 : nous avons evalue la relation entre l’activite d’ABCB1 et les caracteristiques cliniques, ainsi que la reponse aux chimiotherapies dans une cohorte de 321 patients atteints de LAM. Nous avons explore l’association entre l’activite d’ABCB1 et la chimioresistance ex vivo, l’expression genique et evalue l’effet d’un inhibiteur d’ABCB1.2/ CD81 : l’elaboration de lignees cellulaires ayant une expression differentielle de CD81, soit par surexpression de l’ADNc ; soit par sous-expression via des shARN nous a permis d’etudier la chimioresistance, la proliferation, l’adhesion, la migration et l’invasion cellulaires. Par microscopie confocale, nous avons etudie la morphologie cellulaire.Des souris NSG ont ete injectees avec ces modeles pour etudier la prise de greffe, le homing et l’invasion tumorale.D’autre part, nous avons xenogreffe des cellules de patients (PDX) pour etudier l’association entre l’expression de CD81 sur les blastes et la prise de greffe.Resultats1/ L’activite d’ABCB1, observee dans 58% des LAM etait associee a une moindre leucocytose, une plus forte expression de CD34, une absence de mutations FLT3-ITD ou NPM1 et a une moindre survie globale et sans evenement. Neanmoins, l’activite ABCB1 n’aboutissait pas directement a une chimioresistance aux anthracyclines ex vivo. La correlation entre l’expression d’ABCB1 et celle des genes de BAALC, CD34, CD200 et CD7, suggere que l’expression d’ABCB1 pourrait etre un indicateur indirect des LAM de haut risque. De plus, l’expression d’ABCB1 etait inversement correlee a celle des genes de cluster HOX et a CD33.2/ Dans les PDX, la prise de greffe etait associee a une plus forte expression de CD81 et le temps de prise de greffe etait correle negativement au niveau d’expression de CD81.Les PDX avec les lignees modifiees avaient une invasion tumorale augmentee lorsque CD81 etait surexprime.Aussi, une forte expression de CD81 induisait in vitro une plus forte 1) adhesion a la fibronectine et aux fibroblastes, 2) migration et 3) invasion tumorale dans une matrice de gel semi-liquide.En microscopie confocale, les cellules exprimant plus le CD81 avaient plus de lamellipodes, impliques dans la migration cellulaire. La chimioresistance a la daunorubicine etait correlee positivement a l’expression de CD81.Conclusions1/ Nous avons demontre l’impact pronostique de l’expression genique, proteique et de l’activite d’ABCB1. De plus, ABCB1 ne serait pas directement implique dans la chimioresistance, son inhibition n’ameliorant pas la survie des patients mais plutot un reflet indirect des formes de LAM de haut risque. Enfin, les patients avec faible expression d’ABCB1 pourraient beneficier d’un traitement anti-CD33 par gemtuzumab ozogamicin associe a la chimiotherapie conventionnelle.2/ Une forte expression de CD81 est associee a un moins bon pronostic chez les patients atteints de LAM et dans notre modele PDX. L’expression de CD81 sur les blastes au diagnostic est associee a une prise de greffe chez les souris NSG, suggerant qu’il pourrait etre un marqueur souche. A present, nous testons un anticorps anti-CD81 comme traitement dans un modele murin. Une forte expression de CD81 augmente les capacites d’adhesion, de migration et d’invasion, mediees par la formation de lamellipodes et nous nous interessons a l’implication des voies de signalisation Rac-RhoGTPase.