秀丽隐杆线虫C3188．8基因的克隆、表达及免疫特性分析

目的克隆、表达野生型秀丽隐杆线虫C3188．8基因，并分析其免疫特性。方法提取人工培养的秀丽隐杆线虫总RNA，逆转录合成eDNA，PCR扩增C3188．8基因，克隆入pMD-18T载体，测序正确后将C3188．8基因亚克隆入带有组氨酸标签的表达载体pET-30a，转人大肠埃希菌BL211中，经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导，表达目的蛋白C3188．8。用钻离子柱亲和层析法纯化该蛋白。融合蛋白采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）鉴定和蛋白质印迹（Western blotting）分析。10只BALB／e小鼠随机均分为抗原免疫组和佐剂对照组，抗原免疫组以纯化的重组C3188．8蛋白免疫小鼠，抗原免疫剂量为40μg，（只·次），共免疫4次，每周免疫1次。佐剂对照组以PBS代替抗原，同法免疫小鼠。每次免疫前取血，末次免疫后1周眼球采血，分离血清，ELISA检测不同时期血清抗体效价。同时以C3188．8蛋白和广州管圆线虫Ⅳ期幼虫虫体可溶性蛋白作为抗原进行Western blotting。结果DNA测序结果显示重组质粒构建成功，并诱导出重组C3188．8蛋白。重组蛋白经质谱鉴定和Western blotting分析证实为目的蛋白。纯化C3188．8蛋白免疫小鼠后，与对照组相比，能产生较高的抗体水平。Western blouing分析显示，重组C3188．8蛋白能被免疫血清识别，且免疫血清与广州管圆线虫Ⅳ期幼虫虫体可溶性抗原存在交叉反应。结论秀丽隐杆线虫C3188．8蛋白具有较好的免疫原性和免疫反应性，重组C3188．8蛋白免疫小鼠血清与广州管圆线虫Ⅳ期幼虫虫体可溶性抗原存在交叉反应。