Interacción de rotavirus con la proteína disulfuro-isomerasa in vitro y en sistemas celulares

Introduccion. La entrada del rotavirus a la celula implica un mecanismo de multiples pasos; las proteinas virales externas interaccionan con cuatro diferentes integrinas y Hsc70. Recientemente reportamos que la infeccion por rotavirus disminuye cuando se bloquea la proteina disulfuro-isomerasa de la superficie celular, lo que sugiere su interaccion con el rotavirus en el proceso de entrada. Objetivo. Establecer la interaccion del rotavirus con la proteina disulfuro-isomerasa en un sistema in vitro utilizando la proteina aislada de higado bovino y, en un sistema celular, utilizando vellosidades intestinales de raton y celulas MA104. Materiales y metodos. Se aislo la proteina disulfuro-isomerasa a partir de un homogenizado de higado bovino utilizando anticuerpos anti-proteina disulfuro-isomerasa acoplados a agarosa mediante enlace hidrazona. La proteina disulfuro-isomerasa purificada se examino por SDS-PAGE y Western blot y se utilizo para estudiar su interaccion in vitro con rotavirus. Esta interaccion se comparo con aquella observada en celulas MA104 y en las vellosidades intestinales de raton. Resultados. La proteina disulfuro-isomerasa purificada mostro homogeneidad electroforetica y fue capaz de unirse a rotavirus en un sistema in vitro. La interaccion proteina-rotavirus fue detectada por ELISA de captura usando la proteina disulfuro-isomerasa bovina purificada y rotavirus de las cepas RRV y silvestre ECwt. La interaccion de particulas de rotavirus purificadas con la proteina disulfuro-isomerasa celular se evidencio con ELISA, usando lisado celular despues de la inoculacion viral. Conclusion. La interaccion rotavirus-proteina disulfuro-isomerasa fue demostrada in vitro, en celulas MA104 y en vellosidades intestinales de raton lactante.