重组anti－CD20 scFv／CD80／CD28/ζ非复制型逆转录病毒的构建及其在Jurkat细胞株中的表达

目的：构建表达anti—CD20 scFv／CD80／CD28/ζ重组非复制型逆转录病毒，转染Jurkat细胞株使其表达目的蛋白。方法：采用DNA重组技术把pBUI，LET上的CD28-ζcDNA插入到已含anti—CD20 scFv／CD80的真核逆转录病毒载体pLNCX质粒上，转染PA317细胞株，收获上清液获非复制型逆转录病毒，感染NIH3T3细胞株，用PCR、流式细胞术检测目的基因在NIH3T3细胞的表达情况，确定病毒滴度。挑取高滴度的包装细胞株收获病毒，感染Jurkat细胞，经G418筛选细胞，用RT-PCR检测目的基因表达情况。结果：经酶切及测序鉴定均证实pLNCX／anti—CD20 scFv／CD80／CD28/ζ的成功构建；用PCR能够从逆转录病毒感染的NIH3T3细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段；流式细胞术检测显示该目的基因能够在NIH3T3细胞中表达目的蛋白；经RT—PCR，能够从转染的Jurkat细胞株中扩增出1条与目的基因大小一致的DNA片段。结论：成功构建高滴度表达anli-CD20 scFv／CDS0／CD28/ζ非复制型逆转录病毒，并能在Jurkat细胞中表达目的蛋白。