Optimisation d'une technique moléculaire de détection des enterovirus dans les coquillages bivalves

Les coquillages sont des animaux filtreurs capables de concentrer des microorganismes et representent ainsi de bons indicateurs de la pollution hydrique. Dans notre travail, nous nous sommes proposes de surveiller la contamination environnementale des coquillages bivalves par les Enterovirus, virus enteriques possedant un pouvoir de transmission eleve dans l'environnement. Nous avons en premier lieu optimise une technique de detection des Enterovirus preleves des coquillages bivalves. Trois parametres ont ete etudiees : (i) Choix de la technique d'extraction et de concentration des virus, (ii) Cinetique de detection des virus par RT-PCR. (iii) Detection de la charge virale limite detectable par RT-PCR. Les resultats que nous avons obtenus ont monte que : (i) La technique utilisant le « Cat Floc » a constitue la meilleure technique d'extraction du virus, (ii) La charge virale limite detectable par RT-PCR est de 8.10 5 particules infectieuses/ml au niveau de la chaire total et de 10 6 particules infectieuses/ml au niveau de l'hepato-pancreas, (iii) Le temps optimal d'accumulation des virus dans les coquillages est de 1 heure. Pour la surveillance de la contamination environnementale, nous avons analyse par RT-PCR la presence des Enterovirus dans 20 echantillons de coquillages bivalves preleves a partir de 4 stations de prelevements: eaux de mer, zone de conchyliculture, lieu de vente (Marche Central) et zone polluee pres d'une station d'epuration. Nous n'avons detecte la presence de ces virus qu'au niveau de la zone polluee pres d'une station d'epuration montrant que la fonction epuratoire de ces stations est loin d'etre satisfaisante. Cependant, nous sommes rassures quant a la qualite de nos ressources environnementales.