Nouvelles méthodologies pour la préparation et la lecture de biopuces à peptides

Les tests d'interactions biomoleculaires miniaturises sur support solide, les biopuces, jouent aujourd'hui un role important dans les etudes biologiques. Ces tests sont bases sur l'immobilisation a la surface de supports solides plans de biomolecules sondes capables de capturer specifiquement des recepteurs en solution. L'immobilisation des sondes et la materialisation de l'interaction en un signal physique mesurable sont des etapes cles dans la mise en oeuvre de ces tests d'interactions. Le travail de these a aborde 2 axes de recherche : la mise au point d'une methode de detection directe des interactions biomoleculaires et l'utilisation du polycarbonate comme support solide plan pour la preparation des biopuces. Generalement, les methodes de detection d'interactions biomoleculaires necessitent l'utilisation de molecules marquees. Des techniques de detection sans marquage, basees sur un changement des proprietes physiques de la surface du a la capture de biomolecules, sont de plus en plus utilisees dans ce domaine. Elles presentent l'avantage majeur de ne pas necessiter de marquage et donc de preserver au maximum les capacites d'interactions du recepteur. Dansla premiere partie de la these, nous demontrons qu'une nouvelle methode optique basee sur l'utilisation d'un microscope optique et d'un substrat de silicium amplificateur de contraste permet la detection directe d'interactions entre peptides et anticorps. Cette methode, Sarfus®, permet la detection d'une couche nanometrique de biomolecules resultant de la capture d'anticorps par des peptides antigeniques. Habituellement, les biopuces sont preparees sur des substrats de verre ou de silicium. L'usage des polymeres synthetiques et du polycarbonate se repand dans l'industrie de l'analyse biologique grâce a leurs multiples avantages. Ils sont bon marche, resistants aux chocs, non coupants et facilement incinerables. Neanmoins, l'immobilisation specifique des biomolecules sonde reste un point critique. Dans la deuxieme partie de ma these, je presente une nouvelle methode pour le micropattening de biomolecules a la surface de substrat de polycarbonate. Notre methodologie est basee sur l'utilisation de nanoparticules de silice. D'abord silanisees, elles sont recouvertes de peptides par ligation chimique puis deposees a la surface d'un substrat de polycarbonate. La qualite des puces ainsi preparees a ete documentee a l'aide de peptides modeles et d'anticorps monoclonaux.