高山被孢霉Δ~6-脂肪酸延长酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达

长链多不饱和脂肪酸花生四烯酸（ARA，C20：4n-6）是合成生物活性物质类二十碳烷酸的初级底物和神经组织的重要组成成分．At脂肪酸延长酶是花生四烯酸△。一合成途径的关键酶之一．根据已经报道的A6_脂肪酸延长酶基因序列设计引物，分别从产花生四烯酸的丝状真菌高山被孢霉ATCCl6266菌株基因组和eDNA中扩增得到该序列．经序列分析后，将来源于eDNA的序列连接到毕赤酵母表达载体pPIC3．5K上，得到重组质粒pPIC3．5K—ELO．用电击转化法将重组载体pPIC3．5K—ELO转化到巴斯德毕赤酵母GSll5中，在缺省培养基上筛选得到毕赤酵母转化菌株pPIC3．5K—ELO．在适宜的培养条件下，添加外源底物7一亚麻酸（GLA）和诱导物甲醇诱导基因表达．气相色谱分析表明该基因在毕赤酵母中得到了表达，底物GLA转化为二高7-亚麻酸（DGLA），转化效率为28．91％．对A6_脂肪酸延长酶进行跨膜分析，表明该蛋白为具有7个跨膜域的膜结合蛋白．