Mise au point d’un instrument d’empreinte protéomique du liquide endocochléaire : efficacité chez l’animal

But de la presentation Les mecanismes de la presbyacousie et des processus degeneratifs des structures de l’oreille interne restent majoritairement inconnus. Vingt-cinq pour cent des pertes neurosensorielles ne peuvent etre expliquees par les lesions histologiques. L’exploration du metabolisme oxydatif ainsi que des voies d’apoptose au sein de la perilymphe apporte de nouvelles perspectives pour la prevention et la prise en charge de la presbyacousie. Cependant les prelevements specifiques de perilymphe sont impossible sans une contamination par du liquide cerebrospinal. Notre objectif est de mettre au point un outil capable de realiser une empreinte moleculaire de la perilymphe pour son analyse en spectrometrie de masse. Materiel et methodes Une puce de silicium nanoporeux (2 mm de long sur 300 μm de d’epaisseur) est fixee sur un support mobile en PEEK (polyether ether ketone). Le systeme est entoure d’une gaine retractable protectrice en PEEK avec une extremite pointue pour passer au travers de la membrane de la fenetre ronde. Trente rats Wistar ont ete operes (15 rats sains et 15 rats exposes a des doses ototoxiques de Gentamicine (160 mg/kg/j) pendant 5 jours). Apres exposition de la bulle tympanique au cours d’un abord ventral, on fraise la capsule osseuse pour acceder a la cochlee et la fenetre ronde. Puis une empreinte est realisee en appliquant notre instrument contre la membrane de la fenetre ronde puis en inserant la puce de silicium dans la cochlee. La puce est examinee en spectrometrie de masse MALDI TOF. Resultats Nos resultats preliminaires mettent en evidence un enrichissement proteique de notre surface nanoporeuse par rapport a une surface d’analyse standard. L’empreinte a pu etre realisee sans difficultes, elle a permis de mettre en evidence des metabolites et des peptides minoritaires de la perilymphe. Elle n’a pas permis a ce jour la detection de metabolites specifiques dans notre modele d’ototoxicite. Conclusion Ce nouvel instrument permet une analyse proteique specifique de la perilymphe. Les perspectives sont la caracterisation du proteome de la perilymphe, la decouverte de biomarqueurs de la degradation auditive et leurs traitements au cours d’une chirurgie d’implantation cochleaire.