AMPK/PPARα/SCAD信号途径对心肌肥大的调控研究*

目的：研究短链酰基辅酶A脱氢酶（short-chain acyl-coenzyme A dehydrogenase，SCAD）在心肌细胞肥大中的作用及腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated proteinkinase，AMPK）／过氧化物酶体增殖剂活化受体α（peroxisome proliferator-activated reeeptor α，PPARα）信号途径对SCAD的调控作用。方法：使用Westem blotting和RT-PCR筛选干扰SGAD的最优序列，并使用非诺贝特（10μmol／L）提前干预24，h后给予干扰序列，观察SCAD的mRNA、蛋白表达和酶活性以及脂质代谢和心肌细胞表面积的改变。采用RT-PCR检测心肌细胞内肥大标志物心房利钠因子（atrial natriuretic factor，ANF）和脑利钠肽（brain natriuretic peptide，BNP）mRNA水平，以明确心肌细胞是否发生肥大。分别用10μmoL／L非诺贝特和0．5mmol／L5-氨基咪唑4-甲酰胺核糖核苷酸（5-amino-imidazoh-4-carboxamide ribonucleotide，AICAR）预处理心肌细胞30min，用20μmol／L苯肾上腺素（phenylephrine，PE）刺激24h，观察心肌细胞表面积和游离脂肪酸含量的变化，并采用Western blotting和RT-PCR检测p-AMPKα、PPARα和SCAD在蛋白和mRNA水平的变化。结果：筛选出的最优干扰序列siRNA-1186和PE诱导的心肌细胞肥大趋势一致，与对照组比较，敲低SCAD表达组的心肌细胞ANF和BNP水平显著升高，心肌细胞表面积明显增大，心肌细胞游离脂肪酸含量明显增加。非诺贝特预处理可显著上调PPARα和SCAD的表达，增加SCAD的酶活性，降低心肌细胞的游离脂肪酸含量，预防敲低SCAD引起的心肌细胞肥大。与对照组比较，PE处理组中p—AMPKα（T172）、PPARα和SCAD的蛋白及mRNA水平均明显下调，SCAD的酶活性下降；与PE组相比，用非诺贝特或AIC-AR预处理30min组的心肌细胞表面积明显减少，心肌细胞游离脂肪酸含量明显降低，p-AMPKα、PPARα和SCAD蛋白及mRNA水平均明显上调，SCAD的酶活性增加。结论：SCAD�