miR-140在内耳毛细胞中的表达及其对突触蛋白Dynamin-1的调控作用

目的研究miR-140在正常小鼠内耳毛细胞的表达分布及其对编码突触蛋白Dynamin-1的Dnm1基因的靶向调控作用。 方法取正常成年C57BL/6小鼠耳蜗基底膜, 免疫荧光染色和原位杂交法观察Dynamin-1与miR-140的表达定位情况。构建荧光素酶报告基因载体转染293T细胞, 通过荧光素酶活性变化明确Dnm1是否是miR-140的靶基因。携带miR-140前体及空载的腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)通过圆窗膜注射传递到耳蜗中, 14 d后RT-PCR检测miR-140及Dnm1的mRNA表达水平, Western blot检测Dynamin-1蛋白的表达水平。 结果miR-140表达于内外毛细胞细胞质, Dynamin-1主要表达于内毛细胞细胞质; 荧光素酶活性检测结果显示, miR-140抑制Dnm1的3'UTR荧光素酶报告基因活性( P P 结论Dnm1是miR-140的靶基因, 且miR-140可以抑制内耳毛细胞中Dynamin-1的表达, 表明miR-140可能通过抑制Dynamin-1蛋白负向调控内毛细胞突触囊泡内吞过程, 进而影响听觉信号的传递。