深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究

引物根据△6-脂肪酸脱氢酶（D6D）基因以及酵母蛋白表达载体pGAPZctA的多克隆位点进行引物设计，并在上游插入ECoRI位点、下游插入XhoI位点，从深黄被孢霉中克隆D6D基因，构建pMD18-T-D6D载体与pGAPZtxA—D6D载体。将重组质粒线性化，并将其电转导入到毕赤氏酵母（PichiapastorisSMD1168）中，Zeocin抗生素筛选高拷贝转化子，对重组菌进行诱导表达。经过Tricine—SDS—PAGE分析和蛋白质免疫印迹（Westernbloting）试验，证明△6-脂肪酸脱氢酶融合蛋白具有免疫学活性。结果成功构建了重组酵母pGAPZdA—SMD1168，为利用基因工程菌生产y-亚麻酸（GLA）奠定理论基础。