Aislamiento, cultivo y diferenciación in vitro de células madre mesenquimales adultas de pulpa dentaria humana

espanolLas celulas madre adultas tienen un gran potencial, para ser utilizadas en la terapia celular y la ingenieria de tejidos. El objetivo de este estudio fue establecer el cultivo de celulas madre mesenquimales adultas de la pulpa dentaria humana y determinar la capacidad de diferenciacion, in vitro, hacia multiples linajes con la utilizacion de medios inductores. Pulpas de 50 terceros molares retenidos, de 24 pacientes de 15 a 24 anos, fueron removidas y procesadas. Para aislar las celulas, se utilizo el metodo de disgregacion enzimatica. Fueron cultivadas en medio DMEM-F12 (del ingles Medio Eagle´s Modificado por Dulbecco´s) suplementado con 15% de SFB, 100 ?M L-acido ascorbico 2-fosfato, 2 mM L-glutamina y antibioticos-antimicotico. Se establecieron 8 lineas celulares de 8 pacientes diferentes. Las celulas fueron observadas diariamente. Se evaluo la morfologia, la eficiencia de formacion de colonias y la proliferacion celular. Se indujo a la diferenciacion odontogenica-osteogenica, condrogenica y adipogenica. Las celulas mesenquimales de pulpa dentaria aisladas, formaron colonias y la mayoria presento una morfologia tipica de fibroblasto. Las celulas expresaron marcadores de celulas madre STRO-1, CD146 y no expresaron CD45 marcador especifico de celulas hematopoyeticas. Mostraron capacidad de autorrenovacion, eficiencia de formacion de colonias y alta proliferacion. Ademas fueron capaces de diferenciarse en multiples linajes. En el presente trabajo de investigacion se aislaron celulas mesenquimales de pulpa dentaria humana con caracteristicas de celulas madre mesenquimales EnglishAdult stem cells have great potential, to be used in cell therapy and tissue engineering. The objective of this study was to establish culture of adult mesenchymal stem cells of the human dental pulp and determine the capacity of differentiation, in vitro, toward multiple lineages with the use of inductors media. Pulps of 50 impacted third molars, of 24 patients from 15 to 24 years, were removed and processed. To isolate the cells, we used the method of enzyme digestion. They were cultured in DMEM-F12 medium supplemented with 15% FBS, 100 ?m L-ascorbic acid 2-phosphate, 2 mm L-glutamine and antibiotic-antimycotic. Established 8 cell lines from 8 different patients. The cells were observed daily. We assessed the morphology, the efficiency of colony formation and cell proliferation. Was induced to odontogenic -osteogenic, chondrogenic and adipogenic differentiation . The mesenchymal cells isolated dental pulp, formed colonies and most presented a morphology typical of fibroblast. The cells expressed markers of stem cells STRO-1, CD146 and did not express CD45 specific marker for hematopoietic cells. Showed capacity of self renewal, efficiency of colony formation and high proliferation. In addition, they were able to differentiate into multiple lineages. In the present investigation were isolated mesenchymal cells of human dental pulp with characteristics of mesenchymal stem cells.