Discriminação alélica do fator V da coagulação por PCR em tempo real: diagnóstico simples e preciso

Dentre as doencas cardiovasculares, a trombose venosa (TV) destaca-se pela associacao entre fatores de riscos adquiridos e fatores geneticos. A resistencia hereditaria a proteina C ativada tem sido identificada como a principal causa dos casos de trombose venosa, sendo frequentemente associada a mutacao fator V Leiden (G1694A). Em individuos homozigotos, o risco de trombose venosa e 50 a 100 vezes maior que em pacientes homozigotos normais, enquanto em pacientes heterozigotos o risco e de 5 a 10 vezes. Baseado na necessidade de avaliacao e acompanhamento de pacientes com casos de trombose venosa e prevencao de seus respectivos familiares, foi desenvolvido um metodo simples de discriminacao alelica do fator V da coagulacao utilizando PCR em tempo real. Foram selecionados 67 pacientes com historico de TV e 51 individuos sem historico de TV. Primeiramente, a discriminacao alelica do fator V foi realizada atraves de PCR convencional seguida de digestao enzimatica (Mnl). Posteriormente, o diagnostico foi realizado por PCR em tempo real. Ambos os metodos foram baseados no polimorfismo G1691A, sendo no segundo utilizado fluoroforos VIC e FAM para marcar os nucleotideos G e A, respectivamente. A tecnica de PCR-RFLP foi utilizada para diagnosticar 95 individuos homozigotos normais, 21 heterozigotos e 2 homozigotos FVL. Utilizando PCR em tempo real foram obtidos os mesmos resultados. A maxima similaridade entre os resultados obtidos por PCR em tempo real e PCR-RFLP indicou precisao significativa do novo metodo de discriminacao e visualizacao alelica do fator V.