日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶重组质粒的构建及其在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达

目的 构建日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶（Sj26GST）重组质粒pET32α-Sj26GST,观察该质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达.方法 超声粉碎日本血吸虫成虫,提取总RNA,通过RT-PCR扩增Sj26GST抗原编码基因,克隆至原核表达载体pET32α（＋）,构建pET32α-Sj26GST,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达后,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western blot 对表达产物进行分析和鉴定.结果 RT-PCR扩增出676 bp的Sj26GST基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST基因成功插入pET32α（＋）中,SDS-PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约为49×10^3的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的24%;Western blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别.结论 成功构建了pET32α-Sj26GST,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性.