应用优化银染测序法鉴定HLA-DQA1^＊0102/^＊0102纯合子

聚合酶链式反应-序列特异引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)技术是目前临床上或科研工作中较为常用的基因分型方法,尤其在人类白细胞抗原(HLA)基因的分型中更是被广泛使用.然而,与其它分型方法一样,PCR-SSP亦无法回避所谓"空白基因"问题.如果在分型过程中出现过多的"空白基因",势必影响某个等位基因频率的统计,进而影响到整个结果的可靠性.对于"空白基因",目前多采用DNA序列测定加以确定到底是等位基因纯合子或存在新的突变,有的学者也结合使用PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法来进行确认[1].我们在用PCR-SSP为109名广西巴马县壮族长寿老人及71名对照组进行HLA-DQA1座位进行基因分型过程中,发现了33个HLA-DQA1*0102/-个体,经本实验室优化的DNA直接银染测序法[2]进行序列测定,最终确定这些个体均为HLA-DQA1*0102/*0102等位基因纯合子.