结核分枝杆菌NrdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986的原核表达及检测牛结核病抗体之应用

目的：在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD2区域的NrdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986蛋白，并评价诊断牛结核病中的应用潜能。方法以结核分枝杆菌 H37Rv基因组 DNA 为模板，PCR 扩增 nrdF1，pe_p grs35，rv1985c 和rv1986基因，并将其克隆到表达载体中，重组表达质粒转化 E ．coli BL21（DE3），IPTG诱导目的蛋白表达，镍柱亲和纯化重组蛋白，SDS-PAGE和 Western blotting 试验鉴定目的蛋白的表达及其反应原性。以纯化的重组蛋白作为包被抗原，通过ELISA方法测定牛血清中特异性抗体，以之评价这些蛋白用于牛结核病抗体检测的价值。结果成功表达了 NrdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986蛋白，相对分子质量为42 ku、63 ku、46 ku和41 ku ，对表达产物进行镍柱亲和纯化，获得了纯度较高的融合蛋白。重组蛋白均能与抗 HIS单抗发生特异反应，表现出良好的反应原性。通过间接ELISA方法检测牛血清中特异性抗体，阳性检出率分别为7．35％、22．06％、16．18％和16．18％。结论结核分枝杆菌原核表达的 N rdF1、PE_PGRS35、Rv1985c和Rv1986蛋白具有用作牛结核病血清学诊断试剂的潜能。