.beta.1-Bungarotoxin單株抗體的製備及其特性之研究

利用SP-Sephadex C-25 管柱層析法以及Sephadex G-75膠過濾法，從台灣 雨傘節(Bungarus Multicinctus，Banded krait)蛇毒中分離純化出 .beta.-BuTX 之isoforms 中毒性最的.beta.1-BuTX，並以SDS-PAGE 證實 其為一均質蛋白質。經由.beta.-mercaptoethanol 之還原反應後，以逆 相高效液體層析法 (Reverse-phase HPLC) 將斷裂後之 A-，B-鏈予以分 離，所得之蛋白質分劃經由 SDS-PAGE 證實 .beta.1-BuTX 之 A-，B- 鏈 成功得被分離。以 .beta.1-BuTX 免疫於 Balb/c 小白鼠，取其脾臟細胞 ，與骨髓瘤細胞 NS-1 進行融合實驗，以酵素免疫測定法篩選產生特異性 抗體之融合瘤細胞株，獲得一單株抗體，並大量製備之。以 ELISA法得知 其class and subclass 為 lgG1(kappa light chain)，並利用放射性免 疫分析法以及 Scatchard 圖示法求得此抗體與抗原之親合常數為， K=1.3*10^8 l/mol，顯示抗體抗原間具有很高之親合力。單株抗體不能中 和 .beta.1-BuTX 之致死毒性，但對於.beta.1-BuTX之 PLA2 酵素活性卻 有部分抑制之能力(18.1%)。同時以ELISA法以及 Wes- tern blotting 法 測試，結果證實此單株抗體所認識之抗原決定基位於 .beta.1-BuTX 之 A 鏈。至於 .beta.1-BuTX 抗原基之詳細結構以抗原基與致死毒性之關係 ，仍需更進一步之研究。