四环素调控 HSV-tk 基因在 HeLa 细胞内表达及抗肿瘤作用

目的 探讨应用四环素调控单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）基因在 HeLa 细胞内表达及抗肿瘤作用。方法 将含有四环素阻遏蛋白基因的质粒载体 pcDNA6/TR 与含有四环素反应元件及 HSV-tk 基因的质粒载体 pcD-NA3．1-TetO2-TKI 先后稳定转染 HeLa 细胞，给予不同浓度的四环素类似物强力霉素，应用 RT-PCR 检测细胞内HSV-tk 基因表达，应用 MTT 法测定转染 HSV-tk 基因的 HeLa 细胞对不同浓度无氧鸟苷（GCV）杀伤的敏感性。结果 转染两种质粒载体的 HeLa 细胞经不同浓度的强力霉素作用48 h 后，RT-PCR 结果显示，随着强力霉素浓度的增大，HSV-tk 基因表达量逐渐增加，强力霉素4μg/ml 时，基因表达的水平达到高峰；加入强力霉素后，该细胞对GCV 杀伤细胞的敏感性增加。结论 本研究成功地应用四环素基因表达调控系统调控了 HSV-tk 基因在 HeLa 细胞内表达及杀伤肿瘤功能，为进一步探讨自杀基因杀伤肿瘤的可调控性提供理论基础。