Production of Mouse Monoclonal Antibody to Extracellular Keratinase ofMicrosporum canis

Microsporum canis由来のextracellular keratinase (eKase) をカラム・クロマトグラフィーや, 高速液体クロマトグラフィーを用いて単離し, BALB/cマウスに免疫し, モノクロナール抗体 (mAb) を作成した. 作成されたmAbをCNBr-activated Sepharose 4B gelにcouplingし, このgelにeKaseを結合させ, gelごと活性を測定したところ活性が証明された. mAbとeKaseを37℃, 15分間反応させると, eKaseによるカゼイン分解能は阻害された. SDS電気泳動を施したM. canis由来のeKaseについて, mAbを用いてimmunoblotをおこなったところ, 48KDのmain bandの他に, 34KDの部位にmainor bandが染色された. 菌株の異なるM. canisより, 異なる時期に, 別々に分離したeKaseのimmunoblotでは, 一方は48, 34, 31.5KD, もう一方は, 34と31.5KDの部にbandが染色された. また, enzymographyの結果, 3者とも同一の部位に溶解像が観察されたことから, eKaseは2種または, 3種のisozymeを持つ可能性が高いものと思われた.