Expresión y caracterización de la proteína gp5 del virus del síndrome reproductor y respiratorio porcino

La Tesis Doctoral se ha dirigido a la expresion de la proteina GP5 del Virus del Sindrome Reproductor y Respiratorio Porcino (VSRRP) en diferentes sistemas y su caracterizacion. La proteina GP5 esta codificada por la ORF5 del genoma del VSRRP, es la glicoproteina mayoritaria de la envoltura del virion y posee epitopos antigenicos implicados en la induccion de anticuerpos que neuralizan la infeccion por el VSRRP, por lo que es de gran interes para el desarrollo de posibles vacunas frente a la enfermedad. El primer objetivo de esta Tesis se centro en la produccion de la proteina GP5 en un sistema eucariota que asegurar las modificaciones postraduccionales de la misma. Para ello se utilizo como vector de expresion un virus de la enfermedad de Aujeszky (ADV) recombinante de fenotipo TK negativo y gE negativo, de similares caracteristicas a las vacunas atenuadas utilizadas en la actualidad en las campanas de control de la enfermedad. Asi se inserto mediante recombinacion homologa la ORF5 de una cepa espanola del VSRRP bajo el control del promotor de la proteina temprana gG de ADV, en el lugar del gen que codifica la gE del ADV, y se obtuvo el virus PRV7. La expresion de la proteina se pudo determinar por inmunoflurescencia indirecta en celulas PK 15 infectadas con el virus. Los resultados obtenidos sugieren que el virus PRV7 podria ser utilizado como un posible producto vacunal bivalente frente a las dos enfermedades. Aun asi la expresion de la proteina GP5 obtenida en sistemas eucariotas es poco eficiente y esto podria relacionarse, al menos en parte, con la capacidad de inducir apoptosis de la citada proteina dleVSRRP. Asi se abordo el siguiente objetivo de la Tesis Doctoral con el fin de estudiar las regiones de la proteina GP5 implicadas en la induccion de apoptosis y obtener mutantes que carecieran de las mismas y no fueran letales para las celulas para mejorar la eficiencia de la expresion. Par