Desarrollo, validación y aplicación de un nuevo ELISA para el control del proceso del antígeno de superficie el virus de la hepatitis B recombinante

Se desarrollo y valido un ensayo inmunoenzimatico en fase solida (ELISA) de tipo sandwich para la cuantificacion del antigeno de superficie del virus de la hepatitis B (VHB), obtenido por via recombinante de la levadura metilotrofica de Pichia pastoris. La cuantificacion se efectuo con el anticuerpo monoclonal (AcM) CB.Hep-1, utilizado como inmunoligando para su purificacion. Los estudios de validacion siguieron la guia ICH Q2 (R1) y la regulacion No. 41, de 2007 del Cecmed. Se cuantificaron hasta 11.9 ng/mL, y se analizaron los parametros de linealidad, especificidad, precision y exactitud. El AcM CB.Hep-1, usado como recubrimiento y conjugado en el ELISA, fue especifico en el reconocimiento del antigeno de superficie del VHB (AgsHB) recombinante, por lo que la cuantificacion fue exacta. En el analisis de varianza para el ensayo de interferencia, el valor de probabilidad para cada tampon de las muestras del proceso de produccion fue mayor que 0.1, para un nivel de confianza de 99%. La variabilidad intraensayo fue entre 0.77 y 7.47%, e interensayo fue entre 1.19 y 19.41%. Para cada muestra fue menor del 10 y el 20%, respectivamente. Se obtuvo un recobrado entre 98.18 y 100.31%, con un coeficiente de variacion por debajo del 20%. El ELISA es especifico para este anticuerpo monoclonal en el rango de concentraciones estudiadas. La curva de calibracion es lineal entre 191.7 y 11.9 ng/mL. Por su precision, especificidad y exactitud, este ELISA se convierte en una poderosa herramienta en el control del proceso de la vacuna recombinante contra el VHB